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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
BRL-3A（大鼠正常肝細(xì)胞）價(jià)格Anti-GPD1L Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞膜蛋白

H-4-II-E（大鼠肝細(xì)胞瘤 ）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-GPER1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)

HEC-1-A（人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-GPI Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

Hep 3B（人肝癌細(xì)胞）報(bào)價(jià)Anti-GPI Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

MDCK（犬腎細(xì)胞）說明書Anti-GPNMB Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 通道蛋白 細(xì)胞膜受體

MS1（小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞）說明書Anti-Granzyme A/GZMA Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)

P19（小鼠畸胎瘤細(xì)胞）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-GPX4 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 激酶和磷酸酶

SVEC4-10（小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-GRB10 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書Anti-GRB10 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

人牙周膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-GPX1 Antibody(原貨號(hào)PB0205)研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-GRB14 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白

大鼠膀胱上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-GRB2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 線粒體

新苦參醇實(shí)驗(yàn)方法Anti-GRB10 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào)

蟾毒它靈 471-95-4實(shí)驗(yàn)方法Anti-GRB7 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 生長因子和激素

朝藿定A110623-72-8*Anti-GRB7 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝

本¤BenzeneGR500ml

ER0801HinfI2000 units5

0444-100GIsitol 肌醇87-89-8100g

Blocking Buffer

麥芽提取物100g

有機(jī)擔(dān)體405405 organic supportGC60-80目25g

ER0902Acc65I (Asp718I)5000 units11

106432-100GCitric acid,triwo7ium salt 檸檬酸三鈉6132-4-3100g

錄霉素10g

Urethane100g

大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人線粒體肽蛋氨酸亞砜還原酶(MSRA)免疫試劑盒 Human Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase,MSRA ELISA kit

氧化酶(XOD)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣

RatMullerianInhibitingSubstance/Ai-Mullerianhormone,MIS/AMHELISA試劑盒大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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巴爾通體通用PCR檢測試劑盒說明書白細(xì)胞介素29抗體Shizukaol C中文名：銀線草醇C別名：分子式：C36H42O10

白介素22受體結(jié)合蛋白抗體Aromadendrane-4β,10α-diol中文名：別名：4β,10α-Aromadendranediol分子式：C15H26O2

白介素21抗體Chlorantholide E中文名：別名：8,9-Dihydroxy-2-oxoeudesma-3,7(11)-dien-12,8-olide分子式：C15H18O5

白介素21受體抗體Arteannuin M中文名：別名：分子式：C15H24O4

白介素-22抗體10-O-Acetylisocalamendiol中文名：別名：分子式：C17H28O3