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產(chǎn)品分類
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英文簡稱:DRG細胞
貨號:LZ-X969825
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
熒光物質均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
葉含乙酰癭花香茶菜素 B多聚甲固定劑PFADNA吖啶橙(acridine orange)熒光檢測試劑盒
葉下珠脂素多聚甲固定劑PFA頂體形態(tài)刀豆素A凝集素熒光標記(ConA-FITC)染色試劑盒
乙基beta-D-吡喃葡萄糖苷多聚甲固定劑PFA頂體形態(tài)花生凝集素熒光標記(PNA-FITC)染色試劑盒
乙酸(肉)桂酯L-Carnosine L-肌肽頂體形態(tài)豌豆凝集素熒光標記(PSA-FITC)染色試劑盒
乙酸-Delta-香樹精酯Fructo-oligosaccharide 低聚果糖活力和頂體反應三色(triple staining)染色試劑盒
乙酸茶酸酯L-Theanine L-茶氨酸活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑盒
乙酸東莨菪素酯AEBSF 絲氨酸抑制劑活力伊紅苯黑(eosin-nigrosin)染色試劑盒
乙酸二聚松柏酯ABTS 2,2-二氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)銨鹽 活力熒光染色試劑盒
乙酸六棱菊亭酯Sudan Ⅱ 蘇丹II 膜功能低滲膨脹法(HOST)檢測試劑盒
乙酸維生素ED-Serine D-絲氨酸 ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒
乙酰D-Serine D-絲氨酸 BWW培養(yǎng)液
乙?;惏叵┧?/span>5,6-Dihydroxy-1H-indole 二羥吲哚DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒
乙酰三尖杉堿Bombesin acetate salt hydrate 蛙皮素DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒
異補骨脂色烯查耳酮Evans Blue 埃文斯藍表面蛋白(surface protein)萃取試劑盒
異長春花苷內酰Evans Blue 埃文斯藍凍存液
DRG細胞皮膚反應因子/炎性因子(SRF/IF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TWF1 ELISA Kit糖蛋白VI/六糖蛋白抗體
凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit鳥苷酸還原酶1抗體
心肌營養(yǎng)素1(CT-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TTRAP ELISA KitG2期/S期應答相關蛋白1抗體
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組織因子途徑抑制因子(TFPI)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TUB ELISA KitGATA結合蛋白6抗體
血凝素(HA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TTC32 ELISA KitGLP-1單克隆抗體
酪氨酸蛋白激酶受體A2(EphA2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TTC39B ELISA Kit顆粒酶B抗體